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本试剂盒主要用于测定植物组织、血清、组织样本等的硝态氮含量。


还原剂将硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸和萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮化合物，其颜色深浅与氮含量在一定范围内呈正比，以酶标仪测定520nm处吸光度，根据硝态氮的标准曲线即可计算出样品的硝态氮含量。


硝态氮是植物最主要的氮源，植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为土壤氮肥的指标，测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

组分	规格	保存条件
试剂(A):硝态氮标准(200μg/mL)	1mL	4℃
试剂(B):硝态氮提取液	500mL	RT
试剂(C):Assay Buffer	500mL	RT
试剂(D):磺胺混合粉剂	10g	RT避光

保存：4℃，避光，有效期1年。

• 蒸馏水
  
• 实验材料：植物组织(大豆、玉米等叶柄)、血液、尿液等。
  
• 电子天平、剪刀、离心机、离心管、试管、滤纸、酶标仪、96孔板。

• 实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即测定，应存于4℃。
  
• Assay Buffer易挥发，请密闭保存。
  
• 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定。
  
• 所测样品的浓度过高时，应用硝态氮提取液或蒸馏水稀释样品后重新测定。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 准备样品：
  
  • 植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织0.1～0.15g，清洗干净，擦干，剪碎成1～2mm的碎片，加入4mL硝态氮提取液，剧烈振荡2～4min，静置澄清后，上清液即为硝态氮提取液，4℃保存备用。
    
  • 血清和尿液样品：按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，4℃保存，用于硝态氮的检测。
    
  • 高活性样品：如果样品中含有较高浓度的硝态氮，可以使用硝态氮提取液或蒸馏水进行恰当的稀释。
• 配制系列硝态氮标准溶液：取硝态氮标准(200μg/mL)用蒸馏水稀释至20μg/mL，再按下表继续稀释：
  

  加入物(mL)	1	2	3	4	5	6	7
  硝态氮标准(20μg/mL)	0	0.05	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5
  蒸馏水	0.5	0.45	0.4	0.3	0.2	0.1	0
  硝态氮浓度(μg/mL)	0	2	4	8	12	16	20

• 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的硝态氮浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
  

  加入物(mL)	标准管	测定管
  系列硝态氮标准(1～7号管)	0.5	—
  待测样品	—	0.5
  Assay Buffer	4.5	4.5
  充分混匀。
  磺胺混合粉剂	0.1g	0.1g

• 硝态氮测定：剧烈振荡1min，静置10min，用双层滤纸过滤至新的离心管中，4000rpm离心5min，取上清液再次离心，取上清液加入96孔板中，以蒸馏水做对照调零，酶标仪520nm处测定标准孔、测定孔吸光度(记为A _标准、A _测定)。

以系列硝态氮标准(1～7号管)浓度(μg/ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定孔的吸光-度计算出样品硝态氮的含量。根据如下公式计算具体样品中硝态氮的含量：

C：从标准曲线上查得的样品的硝态氮浓度(μg/ml)
V：样品提取液的总体积(ml)，本法中为4mL
m：样品的质量(g)

C：从标准曲线上查得的样品的硝态氮浓度(μg/mL)
N：稀释倍数


附录1：标准曲线制作
在室温条件下按说明书操作，用酶标仪在505nm对系列标准进行吸光度的测定，其数值及标准曲线如下(仅供参考)：

硝态氮标准(μg/mL)	0	2	4	8	12	16	20
吸光度	0.042	0.057	0.086	0.104	0.144	0.172	0.197

注意：根据我们的测定经验，1μg/mL以下、200μg/mL以上的样品，OD值可能有偏差，需调整样品浓度或体积重新检测。
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